T98G人多形性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞
細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài):上皮樣;多角形
細(xì)胞傳代:1:2~1:4傳代;每周2~3次
細(xì)胞純度:92%上細(xì)胞神經(jīng)元細(xì)胞標(biāo)記物為陽性
細(xì)胞凍存:液氮凍存(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS)
細(xì)胞活力:代取材活力≥90
產(chǎn)品復(fù)蘇率≥60培養(yǎng)兩天就能清晰看到軸突與樹突,培養(yǎng)時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)13-16天。
質(zhì)量控制:本產(chǎn)品經(jīng)過了細(xì)菌、真菌、霉菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體檢測(cè)。
培養(yǎng)操作步驟
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)*的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
T98G人多形性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞
細(xì)胞處理方法:
一、貼壁細(xì)胞
1、 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時(shí)。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基,到50ml離心管中,剩下細(xì)胞密度達(dá)到80%至90%可以傳代,如沒有達(dá)到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細(xì)胞,對(duì)50ml上清進(jìn)行離心收集細(xì)胞,如果細(xì)胞連片狀態(tài),棄掉上清對(duì)收集的細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化(1ml胰酶37度),接種培養(yǎng)。
二、懸浮細(xì)胞
1、接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5、1000rpm,5min 離心,用吸管小心吸出上清,加入培養(yǎng)基,重懸細(xì)胞。
6、將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細(xì)胞培養(yǎng)瓶種,加入新鮮培養(yǎng)基,置于 37℃,5%CO2 培養(yǎng)(大部分細(xì)胞)。