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產(chǎn)品名稱:

HCC-78人肺腺癌細(xì)胞

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2024-07-28
HCC-78人肺腺癌細(xì)胞
該細(xì)胞公司*,培養(yǎng)狀態(tài)下的,現(xiàn)貨一周供應(yīng),我公司可100%保障該細(xì)胞的質(zhì)量,代數(shù)年輕活性好,不含有細(xì)菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體 。

產(chǎn)品概述

HCC-78人肺腺癌細(xì)胞

【中文縮寫】    HCC-78細(xì)胞

 【背景資料】    見細(xì)胞說明書

 【產(chǎn)品來源】    細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)建系

     提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細(xì)胞特性,一般細(xì)胞培養(yǎng)PBS量是10%,如果出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不良情況,可以提高PBS量到15%,待細(xì)胞穩(wěn)定后,調(diào)回PBS量10%,對于初次實驗者,一般細(xì)胞培養(yǎng),都需要加入雙抗防止細(xì)胞污染,細(xì)胞匯合度達(dá)到90%,我們開始寄送,細(xì)胞這樣可以保持細(xì)胞收到時,良好的細(xì)胞活力。復(fù)蘇細(xì)胞注意事項:

1收到細(xì)胞后當(dāng)天換液,全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基,放進(jìn)培養(yǎng)箱,第二天再消化。

2邊觀察邊消化,根據(jù)細(xì)胞的形態(tài),終止消化時間,采取以半分鐘間隔吹打細(xì)胞邊緣,如可吹打下來,即終止消化。客戶摸索比較好的消化時間。

3隨細(xì)胞有一份細(xì)胞操作說明書,請客戶仔細(xì)查看。

4記得加1%雙抗,降低被污染的概率。另外盡早凍存留種,以備后用。

5售后時間為一周,僅限于細(xì)胞本身的質(zhì)量問題,而因乙方自己不當(dāng)操作(不規(guī)范操作,消化過度,不加雙抗導(dǎo)致的污染等)導(dǎo)致的細(xì)胞問題不在售后范疇。

6收到細(xì)胞后,如細(xì)胞狀態(tài)不佳,或培養(yǎng)中遇到問題,煩請當(dāng)天盡快聯(lián)系,以便處理。當(dāng)天及時反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù),請您務(wù)必重視。

7剛收到細(xì)胞時,胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天,利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài),細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,再調(diào)回10%即可。

(其中1,2條針對于貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞詳情請見細(xì)胞操作說明書)"   

    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管(兩支)

        【產(chǎn)品規(guī)格】    1*10(6)

        【安全級別】    1

        【產(chǎn)品種屬】    人

        【組織來源】    肺

        【細(xì)胞形態(tài)】    上皮細(xì)胞樣

        【細(xì)胞特性】    貼壁

"細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇和使用:

MEM:成分簡單,細(xì)胞貼壁細(xì)胞

DMEM:分高糖型和低糖型。

IDMEM:適合細(xì)胞密度低,生長困難的細(xì)胞。如雜交細(xì)胞的篩選,DNA轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選培養(yǎng)。

RPM1640:應(yīng)用*泛的培養(yǎng)基之一。懸浮細(xì)胞培養(yǎng),主要針對淋巴細(xì)胞,也適合其他細(xì)胞。

199、109培養(yǎng)基:成分齊全,培養(yǎng)效果較好。

F10培養(yǎng)基:適合小鼠及人類二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。

F12培養(yǎng)基:適合單細(xì)胞分離培養(yǎng)及無血清培養(yǎng)。

McCoy’s5A培養(yǎng)基:特別適合原代細(xì)胞及較難培養(yǎng)細(xì)胞的生長。"    95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)

           細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

        【培養(yǎng)條件】    詳見細(xì)胞說明書

        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

        【凍存條件】    詳見細(xì)胞說明書

        【主要文獻(xiàn)】    請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

細(xì)胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法:

傳代培養(yǎng):是指細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉(zhuǎn)移,接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細(xì)胞,可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代,部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代,或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。

HCC-78人肺腺癌細(xì)胞

培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸鈉 0.11g/L);優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

細(xì)胞注意事項:

1.收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(4h左右),穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3.靜置后鏡檢,拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長情況。

4.  懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞瓶內(nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無菌離心管內(nèi),1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min,培養(yǎng)基上清可備用,管底細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞瓶內(nèi)培養(yǎng);若密度未超過80%,細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),待達(dá)到80%時再正常傳代。備注:聚團(tuán)生長慢,有密度依賴,必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng),3天一次半量換液一次,1-2周傳代一次

貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。備注:細(xì)胞貼壁慢,傳代后細(xì)胞放2天不動。

5.細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4℃保存?zhèn)溆?,可補(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,一半用客戶自備的培養(yǎng)基,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳。

 

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